(1)異種間での胚盤再構築を可能にするために必要な嚢胚期以前のキンギョの発生段階を、組織学的、細胞学的、発生遺伝学的な視点から検討を加えた。20℃の培養下で同調卵割から非同調卵割への移行(中期胞胚期遷移)は、9回の同調卵割の後受精約6時間に起こり、この時期以降を中期胞胚期と定めた。中胚葉分化の指標となるgoosecoidとno tailの発現は受精後8時間に観察され、この時期以降を後期胞胚期と定めた。(2)キンギョおよびゼブラフィッシュの、初期胚発生過程におけるPGCsの形態及びその動態を組織学的に明らかにした。キンギョでは20℃の培養下で受精後30時間に組織学的に区別されるPGCsが胚全体に広く分布した。この時期のPGCsを生体外部から細胞の大きさによって区別できる可能性が示された。しかしながら、これ以前の発生段階では区別できなかった。ゼブラフィッシュでは、組織学的なPGCsを6体節期まで遡ることができた。(3)PGCsの起源を実験発生学的に検討した結果、キンギョのPGCsは中期胞胚期には分化する割球が決まっており、その多くは胚盤の下部に位置するという結果が示された。(4)ゼブラフィッシュの2系統間、あるいはキンギョと3倍体のフナより作成された胚盤の下部を重複されたキメラ個体からは、両系統あるいは両亜種の生殖細胞由来の子孫が生まれることが明らかとなった。しかしながらその頻度には個体により差が見られ、PGCsの分化に必要な要因についてさらに調べる必要があると考えられた。(5)中期胞胚期で胚盤再構築をおこなったキンギョとゼブラフィッシュのキメラ胚は正常に発生しなかった。キンギョの胞胚にゼブラフィッシュの胞胚の下部を注入したキメラ胚の生殖隆起には、両種のPGCsが観察された。しかし、移植細胞由来の子孫を得るまでには至らなかった。
(1) In order to contribute developmental technology, the pre-gastrula stage were studied by cytological, histological or biochemical viewpoints in goldfish. Synchronous cleavages occur 9 times every about 30min from 50min to 6h post-fertilization at 20C,and, thereafter, transpose asynchronous phase, suggesting mid-blastula transition (MBT). This timing is staged as the mid-blastula. Genomic expression of mesodermal markers, goosecoid and no tail, are detected with in situ hybridization assay from 8h post-fertilization. This timing is staged as the late-blastula.
(2) Histological observation was performed for diffentiation of primordial germ cells (PGCs) in goldfish and zebrafish. PGCs were histologically detected at the 7 to 9 somite stage in goldfish and at the 6 somite stage in zebrafish, but did not before the stages.
(3) In order to elucidate the origin or primordial germ cells (PGCs) of goldfish, it was investigated whether partial deletion or duplication of blastoderm at the mid-blastula stage effects on the numbers of PGCs in 10-day-larva after fertilization or not. The number of PGCs were decreased in larvac developed from the embryos extirpated lower half of blastoderm, but not in larvae from the embryos extirpated upper half of blastderm. Those were increased in larvae developed from the embryos duplicated lower half of blastoderm.
(4) The chimeric fish which lower part of crucian-carp blastoderm was transplanted to the middle part of goldfish blastoderm at the midblastula stage, reproduced the eggs from two strains. The chimeric fish in zebrafish, in which entire blastoderm of golden strain was transplanted to animal part of blastoderm of wild strain at the mid-blastula stage, also reproduced the eggs of two strains.
by YAMAHA, Etsuro